小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離方法有全骨髓法和密度梯度離心法，全骨髓法即根據(jù)干細(xì)胞貼壁特性，定期換液除去不貼壁細(xì)胞，從而達(dá)到純化MSC的目的。密度梯度離心法即根據(jù)骨髓中細(xì)胞成分比重的不同，提取單核細(xì)胞進(jìn)行貼壁培養(yǎng)。

　　分離培養(yǎng)結(jié)果的差異可能是由于各個(gè)研究小組標(biāo)本來(lái)源、采用的分離方法不同從而所獲得的細(xì)胞不同，或者用來(lái)檢測(cè)的細(xì)胞代數(shù)不同，或者培養(yǎng)過(guò)程中用的胎牛血清不同，導(dǎo)致MSCs獲得或失去這些表面標(biāo)記物的表達(dá)。

　　小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)一定要用塑料培養(yǎng)瓶，不能用玻璃的。因?yàn)橄箝g質(zhì)干這類(lèi)的基質(zhì)細(xì)胞不易貼玻璃，而且現(xiàn)在買(mǎi)的培養(yǎng)瓶都涂有一層促細(xì)胞貼壁的物質(zhì)，而且隨著細(xì)胞的擴(kuò)增，端粒的長(zhǎng)度不變，單個(gè)MAPC來(lái)源的細(xì)胞群不僅能在體外向3個(gè)胚層的細(xì)胞分化，而且能在體內(nèi)能夠向各種組織細(xì)胞分化，相比較而言，形態(tài)與MSC相似的體外培養(yǎng)的皮膚成纖維細(xì)胞則不具有類(lèi)似的分化潛能。

　　原代分離的間充質(zhì)干細(xì)胞在接種后培養(yǎng)24小時(shí)，細(xì)胞開(kāi)始貼壁，胞體呈圓形或多邊形，培養(yǎng)第3-5天，細(xì)胞開(kāi)始較緊密貼附壁上并開(kāi)始有細(xì)胞呈梭形，并不斷長(zhǎng)大、變長(zhǎng)，但未觀察到細(xì)胞分裂，隨著細(xì)胞數(shù)的增加，細(xì)胞的生長(zhǎng)速度變快，逐漸成漩渦狀排列，培養(yǎng)第12天貼壁細(xì)胞長(zhǎng)滿(mǎn)瓶底的80%，并融合成片。采用貼壁培養(yǎng)法可獲得足夠數(shù)量、生長(zhǎng)狀態(tài)良好、增殖能力強(qiáng)的間充質(zhì)干細(xì)胞，隨傳代數(shù)增加，其純度增加，且該方法簡(jiǎn)單、實(shí)用。